Carlos Arregui.

Instituto de Investigaciones Biotecnológicas, UNSAM-CONICET, Buenos Aires.

"Disección de dominios funcionales en proteínas de adhesión durante la diferenciación neuronal"

Las caderinas e integrinas son moléculas de adhesión esenciales para el desarrollo del sistema nervioso. La función de ambos receptores depende del anclaje de sus dominios citoplasmáticos al citoesqueleto. Nosotros empleamos una estrategia basada en péptidos para definir regiones funcionalmente importantes en el dominio citoplasmático de la N-caderina. Un péptido con la secuencia de unión a -catenina ("CBP") compite por la unión de esta proteína a la N-caderina, provocando la pérdida de la adhesión homotípica. Notablemente, un péptido con la secuencia adyacente al dominio de transmembrana ("JMP") provoca la inactivación coordinada de N-caderinas e integrinas. A nivel molecular JMP promueve la translocación de la tirosín kinasa Fer del complejo de caderinas a las integrinas, evento esencial para la inactivación de ambos receptores. Recientemente aplicamos esta metodología para evaluar el rol de caderinas e integrinas en la maduración de dendritas. Como sistema de estudio empleamos retina de pollo la cual puede cultivarse entera y continúa su desarrollo de manera similar a la situación in vivo. Las neuronas ganglionares de la retina de pollo completan la maduración de sus dendritas alrededor del día 14 del desarrollo embrionario (E14). Retinas de E12 se transfectaron con GFP para visualizar las neuronas ganglionares y fueron cultivadas en presencia de los péptidos JMP y CBP. Alternativamente la síntesis de los péptidos fue inducida endógenamente mediante transfección. Después de 48h en cultivo las retinas fueron fijadas y las dendritas fueron reconstruídas mediante microscopía confocal. El péptido JMP produce un colapso total del árbol dendrítico mientras que el péptido CBP no difiere del control. Bloqueando el efecto de JMP sobre las integrinas se rescata el fenotipo control. Finalmente el empleo de un péptido que inactiva directamente las integrinas produce un efecto similar al de JMP. Los resultados muestran que es posible "disecar" los dominios citoplasmáticos de caderinas e integrinas mediante péptidos que compiten por interacciones específicas. Nuestros estudios indican que las integrinas son esenciales para mantener la estructura y estabilidad de las dendritas.